Sarah Wayne Callies grandit sur l'île de Hawaï, mais revient sur le continent pour suivre des études supérieures. Diplômée en études féministes et indigènes en 1999, elle poursuit sa passion de la comédie au "Conservatoire National d'art dramatique de Denver" (Colorado) d'où elle sort avec un Master en 2002.
Elle décroche son premier rôle l'année suivante dans la série Queens Supreme (2003). Malheureusement, l'aventure s'arrête au bout de 3 épisodes faute d'audience. Elle passe ensuite par New York Unité Spéciale et Dragnet avant de devenir la moitié de Jane et Tarzan (2003). L'histoire est encore une fois écourtée puisque seulement 8 épisodes sont tournés. À 28 ans, l'actrice ne se décourage pas et rend visite au petit génie des maths de Numb3rs (2005). Quelques mois plus tard, elle enfile la blouse de docteur pour consulter au pénitencier de Prison Break (2005) où les beaux yeux de Wentworth Miller ne la laissent pas indifférente. Compte tenu du succès de la série, ce rôle important la fait connaitre du grand public.
S'essayant en parallèle et par la suite au grand écran, sans réelle réussite, Sarah Wayne Callies trouve un deuxième grand rôle dans la série apocalyptique The Walking Dead. Dans la peau d'une mère de famille cherchant, en compagnie des siens, à survivre dans un monde peuplé de zombies, la comédienne crève l'écran pendant les 35 premiers épisodes de cette série à l'audience qui atteint des sommets.
En 2014, elle est à l'affiche de Black storm, un film catastrophe avec des tornades destructrices dans la lignée de Twister.
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