Vincent D'Onofrio fait ses premières armes de comédien dans de petits films universitaires à New York, avant d'intégrer au début des années 80 les prestigieux cours d'art dramatique de l'Actors Studio et de l'American Stanislavski Theatre. Cette expérience l'amène à se produire sur différentes scènes de Broadway et d'entamer sa carrière cinématographique dans le film comique The First turn-on !!, en 1983.
Vincent d'Onofrio se fait remarquer par son inquiétante performance dans le film de Stanley Kubrick, Full metal jacket, pour lequel il n'hésite pas à grossir d'une trentaine de kilos. Cette performance lui permet de travailler avec les plus grands réalisateurs : pour Oliver Stone et Spike Lee, il joue dans deux films historiques, JFK et Malcolm X, où il interprète le même personnage, Bill Newman.
Son regard inquiétant amène très souvent Vincent d'Onofrio à interpréter des rôles troubles, que ce soit dans des superproductions (Edgar le cafard extraterrestre dans MIB Men in Black, 1997), des comédies dramatiques (Feeling Minnesota) ou des thrillers (The Cell, 2000, où il campe un tueur en série face à Jennifer Lopez). En 2002, cet acteur qui se métamorphose souvent pour les besoins d'un rôle, incarne un trafiquant de drogue déjanté dans le film noir Salton sea, porté par Val Kilmer.
L'année 2001 marque l'arrivée de Vincent d'Onofrio au casting de la série télévisée New York Section Criminelle dans le rôle du Détective Robert Goren. Le succès public est immédiat. Il revient au cinéma, en 2006, aux côtés Jennifer Aniston et Vince Vaughn, dans la comédie romantique La Rupture. En 2007, il est à l'affiche du drame Little New York.
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